Цялото съдържание на iLive е медицински прегледано или е проверено, за да се гарантира възможно най-голяма точност.
Имаме строги насоки за снабдяване и само свързваме реномирани медийни сайтове, академични изследователски институции и, когато е възможно, медицински проучвания, които се разглеждат от специалисти. Имайте предвид, че номерата в скоби ([1], [2] и т.н.) са линкове към тези проучвания.
Ако смятате, че някое от съдържанието ни е неточно, остаряло или под съмнение, моля, изберете го и натиснете Ctrl + Enter.
PCR като метод за диагностициране на генетични заболявания
Медицински експерт на статията
Последно прегледани: 04.07.2025
PCR е ново постижение на молекулярната генетика, използвано за амплификация на ДНК и позволява бързо in vitro размножаване на специфичен ДНК регион (т.е. всеки ген от интерес) повече от 200 000 пъти. За провеждане на реакцията е достатъчно да има ДНК материал от една клетка; количеството ДНК, амплифицирано чрез PCR, е толкова голямо, че тази ДНК може просто да бъде оцветена (не се изисква използването на радиоактивни сонди след електрофореза). Предпоставка за провеждане на PCR е познаването на нуклеотидната последователност на амплифицирания ДНК регион за правилния подбор на изкуствено синтезирани праймери.
В момента PCR е едноепруветъчен процес, състоящ се от повтарящи се цикли на амплификация (възпроизвеждане, копиране) на специфична последователност от ДНК молекула, за да се получи достатъчно голям брой копия, които могат да бъдат идентифицирани чрез електрофореза. Един от ключовите компоненти на реакцията са „праймерите“ - синтетични олигонуклеотиди, състоящи се от 20-30 бази, комплементарни на „местата“ (области) на отгряване (прикрепване) върху идентифицираната област от матричната ДНК.
PCR протича автоматично в програмируем термостат - термоциклер (усилвател). Тристепенният цикъл, който води до получаване на точни копия на идентифицирания участък от матрична ДНК, се повтаря 30-50 пъти в съответствие със зададената програма на термоциклера. В първия цикъл олигопраймерите се хибридизират с оригиналната матрична ДНК, а след това (в следващите цикли) с новосинтезираните ДНК молекули, докато те се натрупват в реакционната смес. В последния случай синтезът на ДНК завършва не в резултат на промяна в температурата, а при достигане на ДНК полимеразния лимит на амплифицирания участък, който определя размера на новосинтезирания ДНК участък с точност до един нуклеотид.
Електрофорезата се използва като метод за откриване на получените ДНК молекули, с помощта на който амплифицираният материал се разделя според размера на ампликоните (продукти на амплификацията).
PCR може да се използва за директно изследване на местоположенията на предполагаеми мутации или полиморфни места, както и за изследване на наличието на други специфични ДНК характеристики.
[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]