Вирус на хепатит А

Вирусният хепатит А е инфекциозно заболяване при хората, характеризиращо се предимно с увреждане на черния дроб и клинично проявяващо се с интоксикация и жълтеница. Вирусът на хепатит А е открит през 1973 г. от С. Файнстоун (и др.) с помощта на метода на имунната електронна микроскопия и чрез заразяване на маймуни - шимпанзета и мармозетки. Същността на метода на имунната електронна микроскопия е, че към филтрата на изпражненията на пациент с хепатит А се добавят специфични антитела (конвалесцентен серум) и утайката се подлага на електронна микроскопия. Поради взаимодействието на вирусите със специфични антитела, те претърпяват специфична агрегация. В този случай те са по-лесни за откриване, а агрегацията под въздействието на антитела потвърждава специфичността на патогена. Откритието на С. Файнстоун е потвърдено в експерименти върху доброволци.

Вирусът на хепатит А е сферичен, диаметърът на вириона е 27 nm. Геномът е представен от едноверижна положителна РНК с mm 2.6 MD. Няма суперкапсид. Типът симетрия е кубичен - икосаедър. Капсидът има 32 капсомера, образуван е от четири полипептида (VP1-VP4). Според свойствата си вирусът на хепатит А принадлежи към рода Heparnovirus, семейство Picornaviridae. По отношение на антигените вирусът на хепатит А (HAV - hepatitis A virus) е хомогенен. HAV се размножава добре в тялото на шимпанзета, бабуини, хамадрилови бабуини и мармозетки. Дълго време вирусът не можеше да бъде култивиран. Едва през 80-те години на миналия век беше възможно да се получат клетъчни култури, в които HAV се размножава. Първоначално за тези цели са използвани непрекъснати клетъчни линии от ембрионален бъбрек на резус макак (култура FRhK-4), а сега се използва непрекъсната клетъчна линия от бъбречни клетки на зелена маймуна (култура 4647).

Съгласно препоръките на експерти на СЗО е приета следната номенклатура на маркерите за вируса на хепатит А: вирус на хепатит А - HAV антитела към вируса на хепатит А: анти-HAV IgM и анти-HAV IgG.

HAV е малка частица с диаметър 27-30 nm, имаща икосаедрична симетрия и притежаваща хомогенност. Електрограмата, получена с помощта на метода на имунна агрегация, разкрива електронно-плътни частици с повърхностно разположени симетрично подредени капсомери. При отрицателно контрастиране в препаратите се разкриват както пълни, така и празни частици. Нуклеокапсидът на HAV, за разлика от този на грипа, няма повърхностни издатини и мембрана. Важно е също, че HAV вирионът няма сърцевидна структура.

Въз основа на своите физикохимични свойства, вирусът на хепатит А е класифициран като принадлежащ към семейство пикорнавируси, род ентеровирус с пореден номер 72. Тази таксономия обаче се оказа твърде необичайна и СЗО счете за възможно да запази терминологията „вирус на хепатит А“.

Както всички вируси от семейство Picornaviridae, вирусът на хепатит А съдържа рибонуклеинова киселина. Някои лаборатории са демонстрирали възможността за клониране на генома на вируса на хепатит А, което открива перспективата за получаване на ваксини.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Резистентност към вируса на хепатит А

Вирусът е относително устойчив на високи температури, киселини, мастни разтворители (без липиди), дезинфектанти и понася добре ниски температури. Всичко това допринася за дългосрочното му съхранение във външната среда. При стайна температура той оцелява в продължение на няколко седмици, при 60°C частично губи инфекциозността си след 4-12 часа, а напълно - след няколко минути при 85°C. Той е силно устойчив на хлор, поради което е способен да проникне във водопроводната вода през бариерите на пречиствателните съоръжения.

Обобщавайки всички данни, можем да характеризираме вируса на хепатит А, както следва:

• естественият гостоприемник е човекът;
• опитни животни - мармозетки, шимпанзета;
• източникът на инфекцията са изпражненията;
• болестта е епидемична и ендемична;
• път на предаване: фекално-орален;
• инкубационен период - 14-40 дни;
• преход към хроничен хепатит - не се наблюдава.

Имунологичните свойства на HAV са следните:

• Прототипни щамове - Ms-1, CR-326, GВG. Всички са имунологично сходни или идентични;
• Антителата - IgM и IgG, се произвеждат в отговор на въвеждането на структурни протеини на вируса и имат защитен характер;
• I. Защитният ефект на човешкия серумен гама-глобулин - предотвратява или отслабва заболяването, ако се приложи преди инфекцията или по време на инкубационния период.

Физикохимичните характеристики на NAU са следните:

• Морфология: безобвивна сферична частица с кубична симетрия, капсидът се състои от 32 капсомера;
• Диаметър - 27-30 nm;
• Плътност в CsCl (g/cm3) - 1,38-1,46 (отворени частици), 1,33-1,34 (зрял вирион), 1,29-1,31 (незрели вириони, празни частици);
• Коефициент на седиментация - 156-160 зрели вириона;
• Нуклеиновата киселина е едноверижна, линейна РНК;
• Относително молекулно тегло - 2,25 x 106-2,8 x 106KD;
• Броят на нуклеотидите е 6 500-8 100.

Стабилността на HAV при физични и химични влияния е следната:

• Хлороформ, етер - стабилен;
• Хлор, 0,5-1,5 мг/л, 5 °C, 15 мин - частична инактивация;
• Хлорамин, 1 g/l, 20 °C, 15 min - пълна инактивация;
• Формалин, 1:4000, 35-37 °C, 72 часа - пълна инактивация, 1:350, 20 °C, 60 минути - частична инактивация.

Температура:

• 20-70 °C - стабилен;
• 56 °C, 30 мин - стабилно;
• 60 °C, 12 часа - частична инактивация;
• 85 °C, 1 мин - пълна инактивация;
• Автоклавиране, 120 °C. 20 мин - пълна инактивация;
• Суха топлина, 180 °C, 1 час - пълна инактивация;
• НЛО, 1,1 W, 1 мин - пълна инактивация.

Представените данни показват, че по своите физикохимични свойства вирусът на хепатит А е най-близък до ентеровирусите. Подобно на други ентеровируси, HAV е резистентен към много дезинфекциращи разтвори и се инактивира напълно в рамките на няколко минути при 85 °C и автоклавиране.

Доказано е, че вирусът на хепатит А може да се размножава в първични и непрекъснати монослойни линии от човешки и маймунски клетъчни култури. Особено активно размножаване на вируса на хепатит А в in vitro култури се наблюдава при използване на чернодробни екстракти от болни маймуни като изходен материал. Трябва да се отбележи обаче, че във всички експерименти по размножаване на вируса на хепатит А върху in vitro култури се обръща внимание на дългия инкубационен период по време на първичните пасажи (до 4-10 седмици), впоследствие натрупването на вирусен генетичен материал се увеличава, но абсолютните стойности остават много незначителни, което дава основание на много изследователи да говорят за непълна репликация на вируса на хепатит А в тъканни култури.

Обобщавайки литературните данни за репродукцията на вируса на хепатит А в екстратъканни култури, може да се каже, че фактът за дългосрочно оцеляване на HAV in vitro е безспорен. Оптималните условия за стабилно високо ниво на репликация на вируса не са окончателно идентифицирани и това възпрепятства изучаването на неговите биологични свойства, получаването на източник на реагенти за производство на диагностика и проектиране на ваксини.

В същото време в литературата могат да се намерят и по-оптимистични оценки за този проблем. Решението на всички въпроси, свързани с култивирането на вируса на хепатит А, е въпрос на близко бъдеще. При изучаване на оптималните условия за размножаване на HAV в културата на ембрионални бъбречни клетки на резус макак бяха идентифицирани две фази: фазата на производство на инфекциозния вирус (до 6-8 дни на ниво 5-ти пасаж) и фазата на интензивно натрупване на вирусния антиген. Показано е също, че най-значителното натрупване на вирусния антиген се случва при условията на така нареченото ролково култивиране (въртящи се колби). Този метод отваря широки възможности за получаване на културен антиген в големи количества и следователно ще се появи изходният материал за приготвяне на диагностични системи и производство на ваксини.

Епидемиология на хепатит А

Вирусът на хепатит А е силно патогенен за хората. Според СЗО (1987), инфекция само с един вирион е достатъчна, за да причини заболяването. Практическата инфекциозна доза обаче вероятно е много по-висока. Единственият източник на инфекция е заразеният човек. Вирусът се отделя в големи количества с изпражненията 12-14 дни преди началото на жълтеницата и през 3-те седмици на иктеричния период. Не са установени съществени разлики в отделянето на патогена при пациенти с иктерична, аниктерична и асимптоматична форма на хепатит А. Пътят на инфекция е фекално-орален, предимно воден, както и битов и хранителен. Пътят на инфекция е фекално-орален, предимно воден, както и битов и хранителен. Основният (първичен) път на предаване на вируса е водният. Възможна е и инфекция чрез въздушно-капковидни инфекции. Податливостта на населението е универсална. Засегнати са предимно деца под 14-годишна възраст. Заболяването има изразена есенно-зимна сезонност.

[ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ]

Симптоми на хепатит А

Инкубационният период варира от 15 до 50 дни, в зависимост от инфекциозната доза на вируса, но средно е 28-30 дни. Веднъж попаднал в организма, вирусът на хепатит А се размножава в регионалните лимфни възли, прониква в кръвта, а след това в чернодробните клетки и причинява остър дифузен хепатит, който е съпроводен с увреждане на хепатоцитите и ретикулоендотелните елементи на черния дроб и намаляване на неговите детоксикационни и бариерни функции. Увреждането на хепатоцитите възниква не поради директното действие на вируса, а в резултат на имунопатологични механизми. Най-типичната картина на хепатит А е остра иктерична циклична форма: инкубационен период, продромален (предиктеричен), иктеричен период и реконвалесценция. Въпреки това, в огнищата на инфекцията се откриват голям брой пациенти с аниктерични и асимптоматични форми на инфекция, броят на които значително преобладава над иктеричните („феномен на айсберг“).

Постинфекционният имунитет е силен и дълготраен, причинен от антитела, неутрализиращи вируса, и клетки на имунната памет.

Микробиологична диагностика на хепатит А

Диагностиката на хепатит А (с изключение на инфекция при животни - шимпанзета, мармозетки, бабуини, с които не разполагаме) се основава на различни имунологични методи: RSC, имунофлуоресцентен метод, хемаглутинация на имунна адхезия (комплексът от вирусен антиген + антитяло в присъствието на комплемент се адсорбира върху еритроцитите и причинява тяхното слепване). Възможностите за използване на тези методи обаче са ограничени поради липсата на специфични вирусни антигени, а имунофлуоресцентната реакция изисква чернодробна биопсия, което е нежелателно. Методът на имунната електронна микроскопия е надежден и специфичен, но е много трудоемък. Следователно, засега единствената приемлива имунологична реакция е методът на имуносорбентен анализ на твърдата фаза под формата на IFM или RIM, особено при модификация на "улавяне" на имуноглобулини от клас М. В нашата страна за тази цел е предложена тестова система - "DIAGN-A-HEP". Принципът на действие на тази тестова система е следният. Първо, антитела към имуноглобулини от клас М (антиимуноглобулини М) се сорбират върху стените на полистиролните ямки, след което се добавя серумът на пациента, който ще се изследва. Ако съдържа IgM антитела, те ще се свържат с антиантитела от клас М, след което се добавя специфичен вирусен антиген (вирус на хепатит А), който се получава чрез отглеждане в клетъчна култура. Системата се промива и към нея се добавят антивирусни антитела, маркирани с хрянова пероксидаза. Ако и четирите компонента на системата взаимодействат, се образува четирислоен „сандвич“:

• антиимуноглобулини М,
• имуноглобулини М (срещу вируса на хепатит А - в серума на изследвания пациент),
• вирусен антиген,
• ензимно-маркирани антивирусни антитела.

За да се открие този комплекс, към ямките се добавя субстрат за ензима. Под въздействието на ензима той се разрушава и се образува оцветен продукт. Интензитетът на цвета може да се измери количествено с помощта на спектрофотометър или фотоколориметър.

Предимството на метода „улавяне“ на IgM е, че антителата от този клас имуноглобулини се появяват по време на първичния имунен отговор и показват активния стадий на инфекцията, те изчезват след преболедуване. Антивирусните антитела, принадлежащи към клас IgG, напротив, персистират дълго време след преболедуване, осигурявайки придобит имунитет. За откриване на вируса на хепатит А е предложен метод с ДНК сонда: като сонда се използва комплементарна vRNA ДНК.

Лечение на хепатит А

Поради факта, че производството на интерферон е нарушено при вирусен хепатит, лечението на хепатит А се основава на употребата на интерферон и индуктора на неговия ендогенен синтез, амиксин.

Специфична превенция на хепатит А

Широко използваната преди това серопрофилактика на хепатит А с гама глобулин не се оправда, поради което основният акцент беше поставен върху провеждането на ваксинационна профилактика, провежда се ваксинация срещу хепатит А. За тази цел се разработват и вече се използват различни видове ваксини. В Русия ефективна ваксина срещу хепатит А е получена още през 1995 г. и сега тя се използва успешно.