13c уреазен тест: подготовка, резултати, положителен, отрицателен

След откриването на бактерията Helicobacter pylori, свързана с хроничен гастрит и стомашни и дуоденални язви, са разработени диагностични методи, включително уреазен тест, който позволява откриването на тези микроорганизми при конкретен пациент, потвърждаване на участието им в развитието на стомашно-чревни заболявания и предписване на ефективно лечение.

Уреазен ензим като биомаркер на Helicobacter инфекция

Бактериите H. pylori се предпазват от киселинната среда в лумена на стомаха по два начина. Първо, чрез увреждане на лигавицата със своите флагели, микроорганизмите достигат до долните ѝ слоеве, чак до епителните клетки, където pH е по-високо (т.е. киселинността е по-ниска). Второ, бактериите неутрализират киселината, като синтезират големи количества от каталитично активния високомолекулен металоензим уреаза или урея амидохидролаза.

Използването на уреаза при диагностицирането на Helicobacter е възможно не само поради цитоплазмената активност на този ензим, но и поради външно взаимодействие с клетките гостоприемници.

Под действието на уреазата протича разграждането на стомашната урея до водороден нитрид (амоняк) и въглероден диоксид (въглероден диоксид). Те реагират със солната киселина в стомашния сок и осигуряват зона на неутрална киселинност около H. pylori, а също така подпомагат метаболизма на бактериалните клетки.

Ето защо уреазата е най-важният фактор за колонизацията на H. pylori в човешката стомашна лигавица, а откриването на уреолитична активност се счита за биомаркер на вирулентността на тази бактерия, който гастроентеролозите – чрез провеждане на уреазен тест – използват за диагностициране на Helicobacter инфекция, както и за наблюдение на резултатите от лекарствено индуцираното унищожаване (ерадикация) на бактериите.

Диагностиката на H. pylori включва инвазивни и неинвазивни тестове – в зависимост от това дали е необходимо ендоскопско изследване на стомаха (фиброгастродуоденоскопия) или не. Инвазивният тест е бърз уреазен тест или експресен уреазен тест (RUT-тест), който изисква вземане на тъканни проби (биопсия). 13C урейният дихателен тест (13C-UBT) е най-често срещаният неинвазивен тест.

Трябва да се отбележи, че неинвазивната диагностика на H.pylori може да се извърши с помощта на кръвен тест за антитела (специфичност на ниво 75%, чувствителност - 84%), ELISA тест на урина (с чувствителност 96% и специфичност 79%) и копрограма за бактериални антигени. Повече информация - Инфекция с Helicobacter pylori: антитела срещу Helicobacter pylori в кръвта

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Показания за процедурата тест за уреаза

Колонизацията на стомашната лигавица от H. pylori сама по себе си не е заболяване; тя е фактор за повишено бактериално натоварване на организма, което при определени условия може да предизвика развитието на редица патологии на стомаха и горния стомашно-чревен тракт.

Показания за диагностика на Helicobacter инфекция, по-специално уреазен тест, са свързани с гастрит с повишена киселинност, антрален и атрофичен гастрит, дуоденит, стомашна и дуоденална язва, стомашен MALT лимфом. След ендоскопска резекция на ранен стадий на рак на стомаха може да се извърши хистологично изследване в комбинация с бърз уреазен тест - FGDS с уреазен тест.

Гастроентеролозите могат да предпишат уреазен тест, ако пациентите се оплакват от чувство на тежест и дискомфорт в епигастралната област, чести киселини след хранене, кисело или гнило оригване, горчивина в устата, гадене, чревни разстройства, болки или спазми в стомаха.

[ 8 ], [ 9 ]

Подготовка

Подготовката за дихателния тест с 13C урея се състои в това пациентът да спре: приема на антибиотици 4 седмици преди теста, и НСПВС, инхибитори на протонната помпа (намаляващи стомашната киселинност) и антиациди или адсорбенти, използвани за киселини - поне две седмици преди това. Приемът на каквито и да е лекарства трябва да се спре пет до шест дни, а пиенето на алкохол и тютюнопушенето - три дни преди теста.

Препоръчително е също да се избягва консумацията на бобови растения около седмица преди тестването, тъй като бобът, грахът, лещата, соята и зърната от боб съдържат уреаза (която предпазва растенията от болести и насекоми вредители).

Вечерта преди теста е противопоказана късна обилна вечеря; в деня на теста трябва да се извършва нормална устна хигиена, а час и половина преди теста не трябва да се пие нищо или да се използват дъвки.

[ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Техника тест за уреаза

Техника на изпълнение:

• Първо се взема основна проба от дишането - издишва се в мек пластмасов контейнер (и се затваря херметически);
• течност с добавена 13C-урея се приема през устата;
• След 25-30 минути се взема втора проба от издишания въздух в друг контейнер.

Получените по този начин проби се анализират на масспектрометър с разделяне на изотопи във втора проба и определяне на тяхната концентрация. Разликата между стойностите във втората и първата проба се изразява като делта (δ) спрямо изходното ниво. Нормалните стойности, т.е. отрицателните стойности на маркирания атом 13C при неинфектирани пациенти варират от 0,15-0,46%, а положителните стойности при наличие на инфекция са 1,2-9,5% със скорост на хидролиза на уреята над 12-14 μg/min.

Казано по-просто: откриването на 13C-маркиран въглероден диоксид в издишания въздух показва, че уреята е хидролизирана от уреазния ензим на H. pylori, което всъщност потвърждава факта на нейното наличие в стомаха.

Дихателен тест за H. pylori

13C-UBT тестът или 13C уреен дихателен тест за Helicobacter pylori е един от най-важните неинвазивни методи за откриване на тази инфекция: със 100% чувствителност и 98% специфичност, рискът от фалшиво положителни и фалшиво отрицателни резултати в сравнение с хистологията и изследването на кръвни антитела е с 2,3% по-нисък.

Анализът се основава на хидролизата на перорално приложена течна урея, маркирана с въглероден атом (стабилен нерадиоактивен изотоп) 13C (50-75 mg 13C-урея, разредена в 100 ml течност) от H. pylori уреаза.

Уреята, маркирана с изотопен индикатор, претърпява хидролиза в стомаха с освобождаване на амоняк и въглероден диоксид, съдържащ маркирани атоми, който дифундира в кръвта и се отделя от белите дробове по време на дишане. Маркираният въглероден диоксид се регистрира от аналитично устройство - масспектрометър, чието действие се основава на недисперсионна изотопен-селективна спектроскопия, или инфрачервен спектроскопски анализатор.

Бърз уреазен тест

Бързият уреазен тест (RUT) се извършва по време на ендоскопско изследване на стомаха и дванадесетопръстника - с помощта на съвременни ендофиброскопи - и едновременно събиране на биопсични проби. Биоматериалът се взема от антралната част на стомаха. Следователно фиброгастродуоденоскопията или FGDS с уреазен тест е инвазивен диагностичен метод.

Получената биопсия се потапя изцяло в подготвена стандартизирана среда, съдържаща агар-гел, урея, киселинно-алкален индикатор фенолсулфофталеин и бактериостатичен агент (добавен за предотвратяване на растежа на замърсяващи микроорганизми и фалшиво положителни резултати).

Ако в пробата от стомашна тъкан присъстват бактерии H. pylori, уреазата, която те произвеждат, ще хидролизира уреята и ще повиши pH, което е ясно видимо, когато индикаторът се промени от жълто на оранжево (при pH 6,8) и лилаво (при pH > 8). 75% от положителните тестове променят цвета си в рамките на 120-180 минути и колкото по-бързо индикаторът променя цвета си, толкова по-голям е броят на бактериите. Но тестовете, които изглеждат отрицателни, се съхраняват 24 часа.

Положителен бърз уреазен тест, какво означава това? Положителен RUT тест – индикаторът става червен – означава, че биопсичната проба, поставена в агаровата среда, съдържа най-малко 105 H. pylori бактерии, въпреки че концентрацията им обикновено е по-висока.

Чувствителността на различните модификации на теста варира в диапазона 90-98%, а специфичността – 97-99%.

Както отбелязват гастроентеролозите, ако заключението на пациента показва рязко положителен уреазен тест (три кръста), това означава: pH > 8 и индикаторът е променил цвета си за по-малко от 60 минути от момента на потапяне на биопсията, което показва голям брой H.pylori и високо ниво на уреазна експресия. Приблизителният брой бактерии може да се преброи по време на хистологично изследване на биопсията под микроскоп и ако той надвишава 40-50 във визуализираната област, нивото на инфекция се счита за високо.

Дихателният тест с 13C урея рядко дава фалшиво положителни резултати и при пациенти със съмнение за стомашна или дуоденална язва, един положителен тест се счита за потвърждаващ диагнозата, докато отрицателен резултат трябва да се потвърди чрез ехография (EGD) с тест за урея.